Cystone 255

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Il calcio ossalato urolitiasi è diventato un problema crescente in molti paesi a causa di variazioni geografiche / genetici e gli stili di vita moderni. Persone che vivono nella siccità e la zona arida soffrono maggiormente di assorbimento intestinale iper di ossalato di calcio che porta a calcoli renali. Si stima che 12). Molti fattori influenzano la crescita di calcoli urinari in cui metabolismo minerale svolge un ruolo importante 3. Le modalità di trattamento come la chirurgia e la terapia farmacologica sono praticate nella gestione di calcoli renali, ma hanno alcune limitazioni. Le procedure chirurgiche come (litotrissia extracorporea) ESWL hanno aumentato rischio di recidiva in pietra e sono, inoltre, non conveniente per chi soffre di poveri. L'armamentario di agenti terapeutici, inoltre, non ha nessun farmaci efficaci ad eccezione di alcuni diuretici tiazidici, come e furosemide. Questo giustifica la ricerca di nuova terapia farmacologica, che sarà redditizio e può avere come bersaglio multipli fattori di rischio eziologici in urolitiasi. Ayurveda, una letteratura autentica classica indiana, ha riferito l'uso tradizionale di Gokshuradi formulazione polierbale (GPF) e viene praticata da molti anni nella gestione di calcoli renali. Nei nostri studi clinici preliminari, GPF ha rivelato espulsione dei calcoli renali nei pazienti naturalmente verificato urolithic che è stata confermata dall'analisi dei raggi X condotta prima e dopo quattro settimane di trattamento 4. GPF si compone di parti di cinque diverse piante medicinali che è, frutta secca di Tribulus Terrestris L. semi di Hygrophila spinosa T. Anders, e le radici di Ricinnus communis L, Solanum anguivi Lamk. e Solanum surattense Burm. GPF decozione è stata preparata miscelando la polvere fine di queste singole parti in proporzione uguale come menzionato nella letteratura ayurvedica e poi è stato somministrato ai pazienti. Le singole piante compongono GPF sono noti per possedere diverse attività farmacologiche. Nella medicina ayurvedica, i frutti di T. terrestris L. sono raccomandati per il trattamento dei disturbi urinari disfunzione erettile, e nella medicina tradizionale cinese, è stato utilizzato come antipertensivo nella malattia coronarica 5. Inoltre stimola la proliferazione dei melanociti e, pertanto, è un trattamento per la vitiligine putativo insieme con il suo noto antibatterico e attività citotossica 6. 7. H. spinosa T. Anders, un altro componente di questa formulazione è stata utilizzata in Ayurveda per vari disturbi come l'ittero, ostruzione epatica, reumatismi, infiammazione, dolore, diuretico, e afrodisiaco e nel trattamento dei disturbi urinari 8. 9. Questa pianta è conosciuta per possedere attività ipoglicemizzante in soggetti umani 10, antitumorale, 11 haematinic 12, antinocicettivo 13, epatoprotettiva 14. attività 15, lavaggio del radicale libero, e la perossidazione lipidica 16. R. communis gambi hanno antitumorali, antidiabetici, e l'attività antiprotozoi 17. Solanum anguivi (Lam.), Noto anche come Solanum indicum sp. distichum (Schumach. e Thonn.), è coltivato per scopi culinari in molte parti dell'Africa, dell'India, e la penisola araba. I frutti di questa pianta sono usati come verdure nutrienti a causa del loro elevato contenuto di amido, calcio, vitamina A, acido ascorbico, e fosfato. Solanum xanthocarpum (SX) Schrad. Wendl. (Famiglia: Solanaceae) è comunemente conosciuto come l'ombra notte indiana o giallo ombra notte a bacca trovato in tutta l'India, per lo più in luoghi asciutti come una pianta infestante lungo i bordi delle strade e le terre di scarto 18. Si è tenuto un luogo di una certa importanza nel indiano Materia Medica, in primo luogo come espettorante e antipiretico. Varie proprietà medicinali sono attribuite ad esso, in particolare nel trattamento di asma, tosse cronica e catarrale febbre 19. È uno dei membri del dashamula (dieci radici) della Ayurveda 20. In Ayurveda, questa pianta è descritto come pungente, amara, digestivo, e astringente alternativa. I suoi steli, fiori e frutti sono amari, carminativo. Root decotto viene utilizzato come febbrifugo, efficace diuretico ed espettorante 21. Anche se, GPF è ben riconosciuta nella medicina tradizionale indiana ad avere effetto antiurolithic, ma non ci sono dati scientifici sono stati pubblicati a sopportarne il meccanismo alla base di azione su calcoli di ossalato di calcio. Quindi questo studio è stato proposto per determinare il potenziale terapeutico e meccanismo di azione di estratti acquosi da questa formulazione nella gestione di urolitiasi impiegando in vitro e in vivo metodi. 2. Materiali e metodi 2.1. Prodotti chimici e reagenti Tutti i prodotti chimici utilizzati erano di grado analitico. glicole etilenico, timolo, glutatione ridotto, 5-5-ditiobis, acido 2-nitrobenzoico, acido tiobarbiturico, furosemide, H 2 O 2. acido tricloroacetico, 1,1,3,3, - tetraethoxypropane, e guanidina cloridrato sono stati ottenuti da Sigma Chemical Company, St. Louis, MO, Stati Uniti d'America. I reagenti utilizzati per i preparati istologici sono stati eosina spirito solubile, ematossilina, e xilene da Himedia Chemical Limited, Bombay, in India. I kit utilizzati in questo studio per la determinazione del calcio, magnesio, azoto ureico nel sangue (BUN), creatinina, superossido dismutasi, glutatione perossidasi, l'ossalato e citrato sono stati acquistati da Spinreact, Germania, e la diagnostica Ambika, India. 2.2. Materiali vegetali Piante utilizzate per la formulazione sono stati raccolti da foreste locali di Nanded Distretto, Maharashtra, India, e autenticati da esperti. campioni Voucher sono stati depositati nel erbario della Scuola di Scienze della Vita, S. R.T. M. Università, Maharashtra, India. parti rispettive di ciascuna pianta come accennato in precedenza sono state raccolte e poi essiccati all'ombra. parti secche sono stati purificati corpi estranei e poi a terra di polvere fine in un macinino. 2.3. Standard Drug Cystone formulazione polierbale dal Himalaya Drug Co Bangalore, in India è stato utilizzato come farmaco standard in questo studio. La formulazione contenuta Didymocarpus pedicellata. ligulata Saxifraga. Rubia cordifolia. Cyperus scariosus. Achyranthes aspera. Onosma bracteatum. Vernonia cinerea. Shilajeet purificata. e Hajrul Yahood Bhasma. 2.4. In Vitro Antiossidante Effetto effetto antiossidante di GPAE è stato determinato da attività scavenging e perossidazione lipidica effetti inibitori dei radicali liberi. 0.1 DPPH antiradicalica che è stato calcolato nell'equazione usando soluzione DPPH come controllo. Perossidazione lipidica attività inibitoria è stata determinata nei reni isolati di ratto che erano elettricamente omogeneizzato in ghiaccio freddo 50 mM tampone fosfato salino (PBS) e portato a pH 7.4. L'omogeneizzato è stato elaborato ulteriormente, e la perossidazione lipidica attività inibitoria è stata determinata con un metodo segnalato 23. Il rapporto di inibizione è stato calcolato utilizzando la formula indicata per l'attività di lavaggio del radicale libero. 2.5. Studi in vivo 2.5.1. Animali La cura degli animali e la gestione era in conformità con le linee guida standard accettati a livello internazionale per l'impiego di animali, e il protocollo è stato approvato dal comitato etico istituzionale animale (AICE numero P25 / 7-2011 / GBR) presso l'Istituto Nazionale della Nutrizione, Hyderabad, India. ratti Wistar (campioni di urina 180h, il cibo è stata ritirata. 2.5.2. Preparazione di GPAE e Cystone per l'alimentazione gastrica Inizialmente, GPF è stato preparato miscelando in parti uguali le rispettive parti di ogni pianta con un rapporto di 1 mg per millilitro di soluzione. 2.5.3 . Diuretic attività di GPAE l'attività diuretica di GPAE stata studiata su ratti Wistar di entrambi i sessi (intervalli 180h. urine totale escreto state raccolte e il volume è stato determinato. il pH delle urine pool di ciascun animale è stato determinato utilizzando pHmetro, na e K concentrazioni di fiamma fotometro, e la concentrazione di Ca 2 utilizzando i kit disponibili in commercio. 2.5.4. effetto di GPAE e Cystone su modello animale di attività urolitiasi Antiurolithic di GPAE e Cystone è stato determinato in un modello animale di ossalato di calcio urolitiasi come descritto da Atmani et al. 25. la dose che aveva causato l'aumento significativo della produzione di urina in studio diuresi è stato scelto per questo studio. Ventiquattro ratti maschi Wistar (peso di 180g) sono stati divisi con pesi corporei abbinati in 5 gruppi di 6 animali ciascuno , che sono stati poi selezionati in modo casuale a ricevere diversi trattamenti come segue. Gruppo ratti I, servito come controllo del veicolo trattati, ha ricevuto intraperitoneale (ip) iniezioni di soluzione fisiologica (ratti Gruppo II 2.5h e acqua ad libitum al giorno per 21 giorni (controllo normale). Ricevuto un trattamento di pietra che inducono per 21 giorni, composto da 0.75 EG da solo in acqua, insieme con il trattamento soluzione salina (controllo positivo del gruppo urolithic). ratti gruppo III ha ricevuto GPAE (50mg / kg) attraverso gavages gastrici e, contemporaneamente, hanno ricevuto un trattamento di pietra che inducono simile al controllo positivo al giorno per 21 giorni (gruppo di trattamento, basso dosaggio). ratti gruppo IV hanno ricevuto GPAE (100 mg / kg) attraverso gavages gastrici e, contemporaneamente, hanno ricevuto un trattamento di pietra che inducono simile al controllo positivo al giorno per 21 giorni (gruppo di trattamento, ad alte dosi). ratti gruppo V ricevuto standard di droga Cystone, (100 mg / kg) attraverso gavages gastriche e trattamento di pietra inducono ricevuto simultaneamente simile al controllo positivo al giorno per 21 giorni (gruppo di trattamento, farmaco standard). 2.5.5. Esame Biochemical Immediatamente prima e alla fine di un totale di 21 giorni trattamento, 24C fino al momento dell'analisi. In campioni di urina acidificati, ossalato, calcio (Ca 2) e magnesio (Mg 2) contenuti sono stati determinati utilizzando kit disponibili in commercio, mentre inorganica fosfato escrezione è stata determinata con il metodo riportato 26. Nei campioni di urina nonacidified, citrato, creatinina e acido urico, mentre nel siero, creatinina e BUN sono stati stimati con l'aiuto dei metodi con kit. Il sangue è stato raccolto tramite puntura cardiaca da animali sotto anestesia etere, e di conseguenza sia i reni e il fegato sono stati asportato. Gli animali sono stati poi sacrificati da CO 2 inalazione. 2.5.6. Esame istopatologico Gli organi sono stati sciacquati nel ghiaccio freddo soluzione fisiologica e pesato. Il rene destro è stato fissato a 10 m, e macchiato con ematossilina e eosina per l'esame al microscopio a luce polarizzata. Per contare il numero di depositi cristallini, un campo di 100x è stato quindi selezionato a caso da ogni regione, e depositi di ossalato di calcio sono stati contati. è stato riportato il numero totale di depositi in ciascun campione, e contenuto di calcio nei tessuti renali è stata determinata mediante spettrofotometro ad assorbimento atomico. 2.5.7. Perossidazione lipidica inibitorio Effetto Il rene sinistro è stato lavorato in 10g, e il surnatante sono stati usati per valutare le varie attività antiossidante ed enzimi formando ossalato e parametri biochimici come glutatione ridotto (GSH), malondialdeide (MDA), e di proteine ​​di carbonile. omogenati renali sono stati stimati per i contenuti MDA da acido tiobarbiturico metodo reattivo 27. Il contenuto proteico carbonilico è stato stimato dalla derivatizzazione proteina con dinitrofenilico idrazina (DNPH) in idrazoni dinitrofenile cromofori con il metodo di Levine et al. 28, e il contenuto di carbonile è stato calcolato utilizzando il DNPH coefficiente di estinzione molare di 22,000C. Glicolato ossidasi (GOx) attività nel fegato e lattato deidrogenasi (LDH) sia in fegato e reni sono stati determinati con il metodo riportato 31. 32. 2.5.8. Analisi statistica I dati espressi sono valori medi meno di 0,05 sono considerati significativi. Le curve concentrazione-risposta sono stati analizzati con la regressione lineare utilizzando Graph Pad Prism (grafico Pad Software, San Diego, CA, USA). 3. Risultato 3.1. Studi in vitro 3.1.1. Antiossidante Effetto GPAE rivelato DPPH attività antiradicalica con IC50 valore di 2,5 (1,05 g / ml, rispettivamente. (A) DPPH attività antiradicalica. (B) La perossidazione lipidica effetto inibitorio della GPAE e il farmaco di riferimento idrossitoluene butilato (BHT). Simboli mostrato sono media SEM (n 3). (a) (b) 3.2. Studi in vivo 3.2.1. diuretico effetto L'effetto di varie dosi di GPAE sul volume di urina di ratto, pH, e Na. K. e Ca 2 escrezione è indicato nella tabella 1. GPAE aumentato volume di urina a 50mg / kg). effetto diuretico di Gokshuradi estratti acquosi polyherbal (GPAEs). I valori indicati sono media S. E.M. (N 6). 0,01 rispetto al controllo. 3.2.2. Effetto osservato nel modello animale i parametri di base registrati prima dell'inizio del trattamento, come peso corporeo, assunzione di acqua insieme con il volume delle urine, il pH e la composizione non erano significativamente differenti tra tutti i gruppi. I parametri registrati dopo il trattamento sono riportati nella Tabella 2. Rispetto ai normali animali di controllo, prese d'acqua e 24s reni erano leggermente più pesante rispetto a quelli degli animali di controllo (Tabella 4). Effetto del GPAE e farmaci standard su 24h parametri biochimici urinari. Standard di droga 100mg / kg Variazione del peso corporeo () 2.32 1.45 8.86 2.06 5.43 1.23 assunzione di acqua mL / 24h 8,45 1,17 10,46 1,26 0,68 0,11 3,16 0,64 3,76 0,31 valori dati sono media S. E.M. (N 6). 0,01 rispetto al gruppo di controllo. P 0.01 contro gruppo urolithic. un fosfato inorganico. L'acido urico b. trattamento Urolithic è stato trovato a disturbare la funzione renale negli animali urolithic come evidente dalla maggiore BUN e la creatinina sierica e la riduzione della clearance della creatinina. GPAE - treated gruppi diminuito la creatinina sierica e livelli di BUN a 100 mg / kg (Tabella 3). Effetto del GPAE e farmaco standard sui parametri del siero. I valori indicati sono media 0,01 contro il gruppo urolithic. f cristallo depositi / 100x: campo, g malondialdeide, h contenuto proteico carbonile, ho ridotto il glutatione, j superossido dismutasi, k glutatione perossidasi, l catalasi, m glicolato ossidasi (nmol di gliossilato formato / mg di proteina), n fegato lattato deidrogenasi (U / mg proteine), o lattato deidrogenasi renale (U / mg di proteina) e contenuto di calcio p renale. studi Istologia delle regioni renali come corteccia, medulla, e papilla negli animali urolithic mostrato molti depositi cristallini birifrangente sotto polarizzata microscopio ottico (figura 2 (b)). Tali depositi sono stati trovati in 3 su 6 ratti da GPAE basso dosaggio (figura 2 (c)), 1 su 6 ratti da dosi GPAE alta (Figura 2 (d)), e 3 su 6 ratti (Figura 2 (e )) dal gruppo Cystone ma visibilmente più piccole e meno abbondante rispetto agli animali di controllo urolithic. La morfologia dei tessuti e integrità dei reni di GPAE - e gruppi Cystone trattati erano paragonabili ai normali animali di controllo (figura 2 (a)). L'atomica analisi assorbimento spettrofotometro rivelato diminuito contenuto di Ca nel GPAE - e Cystone - (P 0,01) (Tabella 4). (A) normale struttura cellulare di ratti di controllo renale (Gr I). (B) glicole etilenico indotta ratti urolithic rene mostrando cristalli irregolare dilatazione e l'infiammazione al microscopio polarizzato (Gr II). (C) I reni di ratti trattati con urolithic GPAE (50mg / kg) che mostrano normale struttura cellulare (Gr. V). La freccia indica cristalli CaOx. (A) (b) (c) (d) (e) 3.2.3. trattamento perossidazione lipidica inibitorio Effetto Pietra di indurre aumento MDA e di proteine ​​di carbonile (P 0,01) sia in fegato e reni sono stati trovati ad essere rafforzata in gruppo urolithic rispetto agli animali di controllo, mentre il trattamento con GPAE è risultata essere protettivo contro questo effetto e cambiamenti ossidativi indotta dal trattamento urolithic a dosi elevate (Tabella 4. Figura 1 (b)). approccio Fitoterapia viene tentata in questo studio come alternativa alla sanitaria primaria. Il Gokshuradi polierbale Formulazione (GPF), che tradizionalmente viene utilizzata nella medicina popolare indiana da diversi decenni per il trattamento di calcoli renali è stata valutata per i suoi effetti antiurolithic. Nei nostri studi precedenti, abbiamo valutato clinicamente l'efficacia di questa preparazione e trovato il suo potenziale in pazienti urolithic naturalmente indotte 4. Il presente studio è un approccio farmacologia inverso in cui gli studi scientifici sono stati effettuati in condizioni controllate per convalidare l'uso tradizionale di GPF e determinare il suo meccanismo alla base di azione sulla ossalato di calcio urolitiasi. Il calcio di sviluppo ossalato di pietra è un processo multifattoriale che coinvolge diversi fattori eziologici. Gli studi hanno dimostrato che la deposizione di cristalli di ossalato di calcio porta al danno cellulare mediato dalla perossidazione lipidica attraverso il libero di ossigeno generazione di radicali. Gli studi hanno rivelato che queste lesioni cellulari favoriscono gli eventi di ritenzione di ossalato di calcio nei tubuli renali, che è importante per lo sviluppo ulteriore pietra 33 39. A questo proposito, il potenziale antiossidante di GPAE è stato determinato radicale scavenging e perossidazione lipidica attività inibitoria liberi di studiare il suo meccanismo di azione. È interessante notare che, GPAE rivelato DPPH scavenging radicali liberi e ha inibito la perossidazione lipidica di ratto omogeneizzato di rene simile a una sostanza chimica antiossidante normale, BHT. Nello studio dell'attività diuretica, GPAE alterato diuresi in maniera dose dipendente e massima diuresi osservato a 100 mg / kg, come quella dei gruppi furosemide trattati. Questi effetti ipocalciurica e diuretiche di GPAE possono contribuire a ridurre urinaria eccellente saturazione dei sali di calcio e quindi in grado di prevenire l'ulteriore formazione di calcoli. Ulteriore effetto antiurolithic di GPAE è stato valutato in un modello animale di calcolosi urinaria indotta da glicole etilenico e cloruro di ammonio in combinazione. Questo modello è spesso utilizzato in ossalato di calcio formazione di calcoli e, pertanto, è stato selezionato per questo studio 25. 40. 41. Dopo 21 giorni, la somministrazione di EG AC ha mostrato grandi cristalli e aggregati in animali di controllo urolithic rispetto ai gruppi GPAE - e Cystone-trattati. Questi agglomerati di cristalli di ossalato di calcio ottenere depositati nei tubuli renali e sviluppare ulteriormente in calcoli renali 25. GPAE ridotto la poliuria associato al trattamento litogenesi rispetto ai gruppi di controllo urolithic. Come per le precedenti relazioni, il trattamento di induzione in pietra porta un aumento di ossalato e la diminuzione di Ca 2 escrezione. Ciò è confermato in questo studio in cui gli animali di controllo urolithic mostrato l'effetto simile, e GPAE - e gruppi Cystone trattati invertito questo effetto 42. 43. trattamento litogenesi portato ad un aumentato deposito di ossalato di calcio nei gruppi di controllo urolithic insieme con lo stress ossidativo determinato da un aumento dei livelli di marcatori di danno ossidativo, cioè, MDA e carbonile contenuto proteico, con ridotta attività degli enzimi antiossidanti e dei livelli di GSH nei reni accompagnato da funzione renale anormale. I tubuli renali erano dilatate in intere reni di tutti i ratti non trattati che conducono al flusso renale disturbati da grandi aggregati di cristallo. Tuttavia, GPAE rivelato significativa diminuzione in tutti questi icone litogeni a dosi superiori insieme con l'attività antiossidante. La presente inchiesta riporta quindi il significativo potenziale di antiurolithic GPAE a dosi più elevate dalla combinazione di antiossidanti, diuretiche ed effetti ipocalciurica. I risultati della formulazione trovato significativa rispetto Cystone che è un farmaco standard disponibili nel mercato usato nel trattamento della urolitiasi e diuretica era confrontabile con il farmaco diuretico standard Furosemide. L'effetto inibitorio di GPAE sulla conservazione dei cristalli di ossalato di calcio nei tubuli renali in tal modo può essere attribuito alla sua diuretico, ipocalciurica, effetto antiossidante insieme con il suo potenziale di inibire parametri biochimici coinvolti nel metabolismo ossalato che razionalizzare il suo uso medicinale per la malattia di pietra urinaria. Il presente studio sarà certamente a beneficio della comunità scientifica mondiale nel fornire una fonte per l'isolamento e la progettazione di una molecola in questo gasdotto ricerca.